Capacidad de formación de biopelículas en especies del género Candida de procedencia clínica / Capability of biofilm formation in Candida genus species of clinical origin

El objetivo de la investigación fue evaluar la capacidad de formación de biopelículas en especies del género Candida provenientes de muestras clínicas con procesos infecciosos. La muestra estuvo constituida por 70 aislados obtenidos de laboratorios clínicos privados. Para la identificación de las especies se utilizó la Prueba de tubo germinativo y la técnica de microcultivo en agar harina de maíz con tween 80, mientras que la cuantificación de la capacidad de formación de biopelículas se realizó por la técnica de microplaca de poliestireno. Entre los resultados obtenidos en la investigación las especies aisladas fueron: Candida glabrata (34%), Complejo Candida albicans (30%), Complejo Candida parapsilosis (27%) y Candida tropicalis (9%), de las cuales 41 aislados (59%) formaron biopelículas, resultando el Complejo Candida albicans y Candida glabrata las especies con mayor grado de formación de biopelículas con 29% cada una, seguida de Complejo Candida parapsilosis con 27% y Candida tropicalis con 15%. Las cepas que tuvieron mayor formación de biopelículas provenían de orina, seguidas de secreción ótica, secreción vaginal y sangre, sin embargo al aplicar la prueba de Chi-cuadrado (x2) de Pearson se determinó que no existe asociación estadísticamente significativa entre la capacidad de formación de biopelículas y el grado de formación con la procedencia clínica así como tampoco hay asociación entre la capacidad de formación de biopelículas y grado de formación con la especie involucrada (p > 0,05)

The aim of this research was to evaluate the capability of biofilm formation in Candida genus species from clinical samples with infectious conditions. The sample consisted of 70 isolates obtained from private clinical laboratories. Germ tube test and agar cornmeal with tween 80 microculture technique were used as species identification, meanwhile, quantification of biofilm formation capacity was performed by the polystyrene microplate technique. Among the results obtained in the research, isolated species were: Candida glabrata (34%), Candida albicans Complex (30%), Candidaparapsilosis Complex (27%) and Candida tropicalis (9%), of which 41 isolates (59%) formed biofilms, resulting Candida albicans and Candida glabrata Complex species with the highest degree of biofilms with 29% each, followed by Candida parapsilosis Complex with 27% and Candida tropicalis with 15%. Strains with more biofilm formation came from urine, followed by ear discharge, vaginal secretion and blood. However, by applying the Chi squaretest the Pearson, it was determined that there was no statistically significant association between thecapability of biofilm formation and the formation degree with clinical origin, neither there is association between the ability of biofilm formation and the formation degree with the species involved (p> 0.05).

Efecto de un extracto etanólico de propóleos sobre Pseudomonas aeruginosa en estado planctónico y sésil / Effect of ethanol extract of propolis on Pseudomonas aeruginosa in planktonic and sessile

Pseudomonas aeruginosa es un bacilo Gram negativo no fermentador de glucosa comúnmente aislado en infecciones nosocomiales. El incremento de la resistencia a los antibióticos y la participación de este microorganismo en patologías que cursan con formación de biopelículas da como resultado la falla usual de los antimicrobianos, por lo que resulta interesante estudiar el extracto etanólico de propóleos (EEP) como alternativa terapéutica frente a este patógeno oportunista. En este sentido, el objetivo principal del estudio fue evaluar el efecto del EEP sobre Pseudomonas aeruginosa en estado planctónico y sésil. El estudio se enmarcó en una investigación de tipo descriptiva, cuasi-experimental. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) y bactericida (CMB) en estado planctónico por el método de macrodilución en tubos y en estado sésil por microdilución sobre biopelículas formadas en placas de poliestireno. Los resultados mostraron que el EEP, posee actividad bacteriostática parcial pero no total a 4% y actividad bactericida a 8% sobre P. aeruginosa en estado planctónico. Mientras que en estado sésil no hubo efecto bacteriostático ni bactericida. Se concluye que el EEP del Edo. Táchira Venezuela es efectivo frente a P. aeruginosa en estado planctónico pero no tiene actividad antimicrobiana sobre biopelículas formadas por la misma especie.

Pseudomonas aeruginosa is a glucose non-fermenting Gram-negative bacillus that is commonly isolated in nosocomial infections. The usual antimicrobials failure is the result of the increase in antibiotics resistance and this microorganism’s involvement in pathologies with biofilm formation. Therefore, the ethanol extract of propolis becomes an interesting subject of study as a therapeutic alternative against this opportunist pathogen. In this regard, the main objective of this investigation was to evaluate the effect of ethanol extract of propolis (EEP) over Pseudomonas aeruginosa in planktonic and sessile state. This research was categorized as a descriptive quasi-experimental type of investigation. It was determined the minimum inhibitory (MIC) and bactericide (MBC) concentration by the macrodilution tubes method in planktonic state, and the microdilution over biofilms formed on polystyrene plates in sessile state. The results showed that whereas there wasn’t a bacteriostatic or bactericide effect in sessile state, the EEP possesses 4% of non total but partial bacteriostatic activity and 8% of bactericide activity over P. aeruginosa in planktonic state. It concludes that the EEP of the Venezuelan state of Táchira is effective against P. aeruginosa in planktonic state but it won’t have antimicrobial activity over biofilms formed by the same species.

Bacilos gramnegativos no fermentadores en agua embotellada: susceptibilidad antimicrobiana y formación de biopelículas / Non fermenting Gram negative bacilli in bottled water: antimicrobial susceptibility and biofilms formation

El agua puede ser un vehículo para agentes patógenos y oportunistas portadores de multiresistencia y con capacidad de formar biopelículas (CFB). Se evaluó la presencia de indicadores microbiológicos y bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNNF) en agua potable envasada y se estudió la susceptibilidad antimicrobiana y la CFB de los mismos. Se seleccionaron al azar 50 muestras de 250 mL obtenidos de envases de agua potable (20 L), provenientes de igual número de hogares. A cada muestra le fue realizado recuento de heterótrofos aerobios (vertido en placa), coliformes totales y termotolerantes (filtración por membrana), CFB (microplaca) y susceptibilidad antimicrobiana (Kirby-Bauer). El 92% y el 84% de las muestras presentaron coliformes totales y termotolerantes respectivamente, valores por encima de lo establecido en la Gaceta Oficial Venezolana N.° 36.395, mientras que el 86% presentó heterótrofos aerobios con cuentas >100 UFC/mL. El mayor porcentaje de BGNNF aislados pertenecía al complejo Acinetobacter baumannii/calcoaceticus (29,3%), seguido de Pseudomonas aeruginosa (17,4%), con moderada capacidad de formar biopelículas. No hubo asociación significativa entre la resistencia antimicrobiana y la CFB (p>0,05). Un porcentaje elevado de las muestras, no se ajustó a los parámetros microbiológicos establecidos en Gaceta, por lo que no se garantiza la inocuidad de las mismas.

Water can be a vehicle for multiresistant carrier pathogenic and opportunist agents with biofilm forming capacity (BFC). The presence of microbiological indicators and non fermenting Gram negative bacilli (NFGNB) was evaluated in bottled drinking water, as well as their antimicrobial susceptibility and BFC. Fifty 250 mL drinking water samples were randomly selected from 20 L drinking water bottles from the same number of homes. Each sample was tested for aerobic heterothrophics (discharged in a plate) counts, total and thermo tolerant coliforms (membrane filtration), BFC (microplate) and antimicrobial susceptibility (Kirby-Bauer). The results showed that 92% and 84% of the samples carried total and thermo tolerant coliforms respectively, values above those established in the Venezuelan Official Gazette N.o 36,395, while 86% presented aerobic heterothrophics with counts >100 CFU/mL. The highest percentage of isolated NFGNBs belonged to the Acinetobacter baumannii/calcoaceticus complex (29.3%), followed by Pseudomonas aeruginosa (17.4%) which has a moderate biofilm formation capacity. There was no significant association between antimicrobial resistance and the BFC (p>0.05). A high percentage of the samples were not adjusted to the biological parameters established in the Official Government Gazette; therefore, it is not possible to guarantee their safety.

Actividad bacteriostática y bactericida de la tintura de propóleos sobre bacterias enteropatógenas / Bacteriostatic and bactericidal activity of propolis tincture on enteropathogenic bacteria

El propóleos es una sustancia resinosa que las abejas Apis mellífera adultas producen para garantizar la total asepsia de la colmena. Otras especies de abejas también producen propóleos. Con el objeto de evaluar la actividad bacteriostática y bactericida in vitro de la tintura etanólica de propóleos comercial al 70 % v/v proveniente de un apiario del Estado Cojedes, Venezuela sobre bacterias enteropatógenas ATCC. Se utilizaron Salmonella entérica subsp entérica serotipo paratyphi A, Salmonella entérica subsp entérica serotipo paratyphi B Salmonella entérica subsp entérica serotipo typhi, Shigella sonnei, Shigella flexneri, Yersinia enterocolitica y Escherichia coli enterohemorrágica (O157:H7). Las cepas mencionadas se expusieron a distintas concentraciones de tintura de propóleos durante 24 horas para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CMB) utilizando el método de macrodilución en tubos. Resultados: Salmonella paratyphi A fue la única bacteria con efecto inhibitorio total en agar BHI. En las demás bacterias se evidenció efecto bacteriostático parcial. Yersinia enterocolítica fue la más sensible con una CMI 4% y CMB 8 %, seguida por Shigella sonnei, Salmonella paratyphi B, Salmonella typhi y Escherichia coli (O157:H7), con CMI 8% Y CMB 11% y finalmente Shigella flexneri y Salmonella paratyphi A fueron las más resistente con CMI 11% y CMB 15%. Se demostró que la tintura de propóleos tiene efecto bacteriostático y bactericida in vitro en las cepas estudiadas y que el etanol presente como solvente no es el responsable de tal efecto.

Propolis is a resinous substance produced by adult bees Apis mellífera to ensure complete asepsis of the hive. Other species of bees also produce propolis. The aim of this study was to assess the bacteriostatic and bactericidal activity in vitro of commercial ethanolic tincture of propolis 70% v/v from an apiary in Cojedes State, Venezuela on enteropathogenic bacteria ATCC. Used Salmonella enterica subsp enterica suptype paratyphi A, Salmonella enterica subsp enterica suptype paratyphi B, Salmonella enterica subsp enterica subtype typhi, Shigella sonnei, Shigella flexneri, Yersínia enterocolitica, and Escherichia coli (O157:H7). The strains mentioned were exposed to different concentrations of propolis for 24 hours to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) using the macrodilution method in tubes. Results: S. paratyphi A was the only bacterium with a total inhibitory effect on agar BHI. In other bacteria, a partial bacteriostatic effect was observed. Y. enterocolítica was the most sensitive with a CMI 4% and CMB 8 %, followed by E. coli (O157:H7). S. typhi, S. paratyphi B and S. sonnei with CMI 8% and CMB 11% and finally S. flexneri and S. paratyphi A were the most resistant with CMI 11% and CMB 15%. Results indicate that propolis tincture has a bacteriostatic and bactericidal effect in vitro in the strains studied, and that such effect is not due to the ethanol present as solvent.

Viabilidad de un aislado de Escherichia coli O157: H7 en queso tipo guayanés usando separación inmunomagnética como herramienta de recuperación / The viability of an Escherichia coli O157: H7 strain in guayanés Ccheese using immunomagnetic separation as a tool for recovery

Se determinó la viabilidad de Escherichia coli O157:H7 en queso guayanés de manufactura artesanal, evaluando distintos esquemas de aislamiento basados en separación inmunomagnética (SIM). Unidades de queso (25 g) fueron inoculadas con 25 y 250 cel/g del patógeno y almacenadas a 4°C. Las piezas se analizaron los días 0, 2, 6, 8 y 10 post-inoculación a través de distintos esquemas de separación inmunomagnética (SIM) que incluían dos caldos de enriquecimiento: agua de peptona buferada sin inhibidores (APB-SI) y agua de peptona buferada con vancomicina, cefixime y telurito (APB-VCT) y dos agares de aislamiento del inmunoseparado: agar MacConkey sorbitol (MCS) y agar MacConkey sorbitol con telurito y cefixime (MCS-TC). Los resultados demostraron la viabilidad del patógeno hasta por 10 días post-inoculación y en el transcurso de este tiempo, para algunos de los esquemas aplicados sobre la base de SIM, se logró un incremento en los porcentajes de recuperación, lo que indica que el número de células inoculadas se elevó con el tiempo. En cuanto a la utilidad de la SIM para la recuperación del patógeno, se observó variaciones en los porcentajes de aislamiento en función del caldo de enriquecimiento y el nivel de células inoculadas. Los mayores porcentajes de recuperación se obtuvieron en las piezas inoculadas con 250 cel/g, con rangos del 35 al 85 por ciento (día 0 y 10 respectivamente) en el mejor de los esquemas SIM (APB-SI/SIM/MCS), mientras que para niveles de 25 cel/g, en el mejor de los casos (APB-SI/SIM/MCS), durante los primeros 6 días no superó el 15 por ciento. El caldo de enriquecimiento de mejor desempeño fue APB-SI (p <0,05) y no se observó diferencias en los porcentajes de recuperación (p>0,05) en función de los agares utilizados (MCS y MCS-TC) para la siembra del inmunoseparado

The viability of an Escherichia coli O157:H7 strain in cottage-industry Guayanes cheese was determined by evaluating several isolation protocols based on immunomagnetic separation (IMS). Cheese units (25 g) were inoculated with 25 and 250 cel/g of this pathogen and stored at 4°C. The pieces were analized at 0, 2, 6, 8 and 10 days post-inoculation through several IMS protocols including two enrichment broths: buffered peptone water without inhibitors (BPW-WI) and buffered peptone water with vancomicyn, cefixime and telurite (BPW-VCT) and two immunoseparation isolation agars: MacConkey-sorbitol agar (MSA) and MacConkey-sorbitol agar with cefixime and telurite (MSA-CT). Results demonstrated the viability of the pathogen for up to 10 days post-inoculation, and during this time, for some of the schemes applied on the IMS base, an increase in recovery percentages was achieved, indicating that the number of inoculated cells increased with time. In terms of the utility of IMS for recovering the pathogen, variations in the isolation percentages were observed in terms of the enrichment broth and the level of inoculated cells. The biggest recovery percentages were obtained in pieces inoculated with 250 cel/g, with ranges between 35 and 85 percent (days 0 and 10 respectively) in the best IMS scheme (BPW-WI/IMS/MSA), while, at levels of 25 cel/g, in the best case (BPW-WI/IMS/MSA), 15 percent was not surpassed during the first six days. The best performing enrichment broth was BPW-WI (p<0.05) and differences in the recovery percentages (p>0.05) were not observed in relation to the agars (MSA and MSA-CT) used for sowing the immunoseparator